BDBIO 无血细胞冻存液是一款化学成分明确的即用型细胞冻存试剂，经过配方特别优化，不 含血清、动物源成分及 DMSO 等，可避免 DMSO 引起的细胞毒性，同时保持细胞较高的活 力和生理活性。 适用于 DMSO 敏感的细胞系及免疫细胞、干细胞等不同类型细胞的冷冻保 存，并可保持干细胞的分化潜能。 使用方法 （一）细胞冻存1.取对数生长期的细胞，去除旧培养液，加入PBS清洗细胞；2.去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）室温孵育2~3min，把单层生长细胞消化下来；3.加入双倍体积的完全培养基或胰酶终止剂终止细胞消化（如果冻存细胞为悬浮细胞按照步骤4-8进行操作）；4.将消化后的细胞悬液或者悬浮细胞液转移至离心管中，进行细胞计数；5.室温1000rpm离心5min；弃掉上清液。6.加入提前预冷好的无血清免疫细胞专用冻存液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，调节冻存液中细胞的最终密度为5×105/ml-1×107/ml（供参考，可根据实际需求进行调整）；7.将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5ml；在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者；8.将冻存细胞放入-80℃冰箱，24h后转入移至-196℃液氮罐长期冷冻保存。（也可适用于细胞的非程序化冻存及-80℃环境短期保存，更多类型细胞系的简化操作需验证后使用）。（二）细胞复苏1.将水浴锅温度调至37℃，取出冻存管快速置于水浴锅内，晃动冻存管直至管中冻存细胞融化成液体；2.将溶解的细胞冻存悬液转移至含有5-10倍体积完全培养基的离心管中，待冻存管中细胞完全融化后，将冻存细胞悬液缓慢加入离心管中，轻轻混匀；3.室温1000rpm离心5min；去除上清液，加入已回温的完全培养基重悬细胞，进行细胞计数，根据计数结果，取适量的细胞悬液接种到新的培养瓶内；4.将复苏好的细胞转移至37℃，5%CO2培养箱中，按常规方法培养。 注意事项 1.试剂包装如有破损或滴漏，严禁使用。2.请遵守严格无菌的工作规范，操作过程避免污染。3.本产品适用于多种细胞类型的冻存，冻存使用前可根据实验需求进行验证。4.使用前应详细阅读使用说明书，在有效期内使用。 声明 仅用于科研使用，不能用于临床诊断和治疗。 保存条件 -20°C保存，有效期18个月。