BDBIO 无血清免疫细胞专用冻存液是一款化学成分明确的即用型细胞冻存试剂，根据免疫细 胞特征进行了特别优化，不含血清、动物源成分、抗生素、激素、生长因子等。采用多重保 护剂（两种以上）组合使用，在削弱水结晶过程的同时，保护细胞免受溶质损伤，降低对细 胞的毒性，在冷冻、储存和解冻过程中提供了高性能的保护环境，可有效维持免疫细胞的活 率和生物性能。 此外 BDBIO 还提供无酚红的无血清免疫细胞专用冻存液（#A405-500，#A405-100， #A405-50）以满足不同的免疫细胞冻存需求。 使用方法 （一）细胞冻存 1.取对数生长期的细胞，去除旧培养液，加入PBS清洗细胞； 2.去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）室温孵育2~3min，把单层生长细胞 消化下来； 3.加入双倍体积的完全培养基或胰酶终止剂终止细胞消化（如果冻存细胞为悬浮细胞按照步 骤4-8进行操作）； 4.将消化后的细胞悬液或者悬浮细胞液转移至离心管中，进行细胞计数； 5.室温1000rpm离心5min；弃掉上清液。 6.加入适量4℃预冷的无血清免疫细胞专用冻存液重悬细胞沉淀，制成细胞悬液（按照细胞 密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存液的用量，推荐冻存密度：1x106- 2x107cells/mL）。 7.将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5ml；在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作 者； 8.将冻存细胞放入-80℃冰箱，24h后转入移至液氮罐中长期冷冻保存。 （二）细胞复苏 1.将水浴锅温度调至37℃，取出冻存管快速置于水浴锅内，晃动冻存管直至管中冻存细胞 融化成液体； 2.将溶解的细胞冻存悬液转移至含有5-10倍体积完全培养基的离心管中，待冻存管中细胞 完全融化后，将冻存细胞悬液缓慢加入离心管中，轻轻混匀； 3.室温1000rpm离心5min；去除上清液，加入已回温的完全培养基重悬细胞，进行细 胞计数，根据计数结果，取适量的细胞悬液接种到新的培养瓶内； 4.将复苏好的细胞转移至37℃，5%CO2培养箱中，按常规方法培养。 注意事项 1.试剂包装如有破损或滴漏，严禁使用。 2.请遵守严格无菌的工作规范，操作过程避免污染。 3.使用前应详细阅读使用说明书，在有效期内使用。 4.本产品含有DMSO，建议用户在低温条件下（4℃或冰上）进行操作，冻存细胞后应尽量 减少冻存细胞在外存放时间，尽快移入-80℃超低温冰箱长期保存。 5.部分对DMSO敏感的细胞，建议使用本产品前对其进行试验性冻存、复苏、培养，确认 性能后再进行正式冻存。 6.该产品在室温条件下放置的时间不宜过长，以免影响冻存效率。 声明 仅用于科研使用，不能用于临床诊断和治疗。 保存条件 2-8℃储存，有效期18个月。