BDBIO 无血清干细胞专用冻存液是一款专门针对干细胞冻存而研发的冻存液，采用渗透性保 护剂、非渗透性保护剂、细胞沉降稳定剂、细胞膜保护剂组合的方案对细胞进行全方位低温 保护，可使冻存过程中溶液冰点降低，提高细胞膜对水的通透性，使细胞内水分在冻结前透 出细胞，防止或减少冰晶对细胞的损伤，同时降低冰冻时细胞周围电解质浓度，避免电解质 损伤，还可以延缓冻存过程中细胞的互相挤压，保护细胞膜，从而有效提高细胞复苏率和活 力。本产品无需程序降温，且无动物成分、无血清，化学成分明确，可在稳定干细胞细胞表 型和生长状态和保持细胞多能性的同时提供最佳的细胞回收效率。 此外 BDBIO 还提供无酚红的无血清干细胞专用冻存液（#A403-500，#A403-100， #A403-50）以满足不同的干细胞冻存需求。 使用方法 （一）细胞冻存 1.取对数生长期的细胞，去除旧培养液，加入PBS清洗细胞； 2.去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）室温孵育2~3min，把单层生长细胞 消化下来； 3.加入双倍体积的完全培养基或胰酶终止剂终止细胞消化（如果冻存细胞为悬浮细胞按照步 骤4-8进行操作）； 4.将消化后的细胞悬液或者悬浮细胞液转移至离心管中，进行细胞计数； 5.室温1000rpm离心5min；弃掉上清液。 6.加入适量4℃预冷的无血清干细胞专用冻存液重悬细胞沉淀，制成细胞悬液（按照细胞密 度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存液的量，推荐冻存密度：5x105- 1x107cells/mL）。 7.将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5ml；在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作 者； 8.将冻存细胞放入-80℃冰箱，24h后转入移至液氮罐中长期冷冻保存。 （二）细胞复苏 1.将水浴锅温度调至37℃，取出冻存管快速置于水浴锅内，晃动冻存管直至管中冻存细胞 融化成液体； 2.将溶解的细胞冻存悬液转移至含有5-10倍体积完全培养基的离心管中，待冻存管中细胞 完全融化后，将冻存细胞悬液缓慢加入离心管中，轻轻混匀； 3.室温1000rpm离心5min；去除上清液，加入已回温的完全培养基重悬细胞，进行细 胞计数，根据计数结果，取适量的细胞悬液接种到新的培养瓶内； 4.将复苏好的细胞转移至37℃，5%CO2培养箱中，按常规方法培养。 注意事项 1.试剂包装如有破损或滴漏，严禁使用。 2.请遵守严格无菌的工作规范，操作过程避免污染。 3.使用前应详细阅读使用说明书，在有效期内使用。 4.本产品含有DMSO，建议用户在低温条件下（4℃或冰上）进行操作，冻存细胞后应尽量 减少冻存细胞在外存放时间，尽快移入-80℃超低温冰箱长期保存。 5.部分对DMSO敏感的细胞，建议使用本产品前对其进行试验性冻存、复苏、培养，确认 性能后再进行正式冻存。 6.该产品在室温条件下放置的时间不宜过长，以免影响冻存效率。 声明 仅用于科研使用，不能用于临床诊断和治疗。 保存条件 2-8℃储存，有效期18个月。