BDBIO无血清细胞冻存液是一款即用型无需程序降温的细胞冻存试剂。广泛适用于多种哺乳 动物细胞（肿瘤细胞和常规细胞）的冻存。产品经过配方优化，不含血清、动物源成分，含 有糖、氨基酸、优质白蛋白等营养物质和更低的DMSO含量配比。大大提高了细胞的复苏 率和活力，可用于细胞长期保存。本产品不仅可以避免使用血清，降低血清中未知成分和病 毒等感染物质给冻存带来的影响与风险，大多数肿瘤细胞可重悬于本产品后直接置于-80℃冰 箱长期保存，过夜后转移到液氮种完成整个冻存过程。如果细胞比较珍贵，建议放置于程序 降温盒或程序降温后保存于-80℃冰箱，过夜后转移到液氮中长期保存。【产品用途】适用于各种类型动物细胞株（肿瘤细胞和常规细胞系）无血清培养体系的细胞冻存，同时适用于含血清培养体系细胞的冻存。 【产品性能指标】指标项 标准值外观颜色 红色透明液体pH 值   6.8-8.0渗透压( mOsm/kg·H20) 1000-1500细菌 阴性真菌 阴性支原体 阴性 使用方法 （一）细胞冻存1.取对数生长期的细胞，去除旧培养液，加入PBS清洗细胞；2.去除PBS，加入适量胰蛋白酶（覆盖培养皿表面）室温孵育2~3min，把单层生长细胞消化下来；3.加入双倍体积的完全培养基或胰酶终止剂终止细胞消化（如果冻存细胞为悬浮细胞按照步骤4-8进行操作）；4.将消化后的细胞悬液或者悬浮细胞液转移至离心管中，进行细胞计数；5.室温1000rpm离心5min；弃掉上清液；6.加入适量4℃预冷的无血清细胞冻存液重悬细胞沉淀，制成细胞悬液（按照细胞密度和所用细胞冻存管的尺寸计算所需冻存液的量，推荐冻存密度：5x105至1x107cells/mL；7.将细胞分装入冻存管中，每管1～1.5ml；在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者等信息；8.针对常规肿瘤细胞：将冻存液重悬后的细胞直接放入-80℃冰箱，过夜后转入至液氮罐中长期保存。针对难养或珍贵细胞：将冻存液重悬后的细胞放入程序降温盒，或者程序降温后再放入-80℃冰箱，过夜后转入至液氮罐中长期保存。（二）细胞复苏1.将水浴锅温度调至37℃，取出冻存管快速置于水浴锅内，晃动冻存管直至管中冻存细胞融化成液体；2.将溶解的细胞冻存悬液转移至含有5-10倍体积完全培养基的离心管中，待冻存管中细胞完全融化后，将冻存细胞悬液缓慢加入离心管中，轻轻混匀；3.室温1000rpm离心5min；去除上清液，加入已回温的完全培养基重悬细胞，进行细胞计数，根据计数结果，取适量的细胞悬液接种到新的培养瓶内；4.将培养瓶转移至37℃，5%CO2培养箱中，按常规方法培养。 注意事项 1.试剂包装如有破损或滴漏，严禁使用。2.请遵守严格无菌的工作规范，操作过程避免污染。3.使用前应详细阅读使用说明书，在有效期内使用。​4.本产品含有DMSO，建议用户在低温条件下（4℃或冰上）进行操作，冻存细胞后应尽量减少冻存细胞在外存放时间，尽快按照步骤移入-80℃冰箱保存。5.部分对DMSO敏感的细胞，建议使用本产品前对其进行试验性冻存、复苏、培养，确认细胞性能后再进行正式冻存。6.该产品在室温条件下放置的时间不宜过长，以免影响冻存效率。 声明 仅用于科研使用，不能用于临床诊断和治疗。 保存条件 2°C-8°C保存，有效期18个月。