| 中文名称 |
CM-琼脂糖凝胶CL-6B |
| 英文名称 |
CM Sepharose CL-6B |
| 有效期 |
3年 |
CM-琼脂糖凝胶 CL-6B 是将羧甲基键合在琼脂糖凝胶上形成的一种弱阳离子交换介质。广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
1 理化指标
*检测条件： 层析柱 16mm×100mm* 柱床高 5cm，25℃，流动相为 0.1mol/L NaCl。
2 贮存
产品应密封贮存在 4℃~25℃（保存溶液为 20%乙醇），通风、干燥、清洁的地方。不能冷冻。用过的柱子贮存在 4℃（20% 乙醇）。
3 应用
本产品具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点，非 特异性吸附低，回收率高，适用于工业规模生产，适用于在 pH 工作范围内可形成正离子的生物大分子的分离纯化，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。
4 使用过程
4.1装柱
（1）让所有的材料和试剂均平衡至层析实验的温度。配制缓冲液，对所有的缓冲液进行脱气处理。
（2）检查层析柱所有部件，特别是过滤网，密封圈，螺旋塞是否紧密，玻璃管是否干净和完整。
（3）根据需要量取相应量的凝胶，用去离子水清洗掉 20%乙醇。
（4）将柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位，务必使底端无气泡。
（5）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。打开柱子出液口，使凝胶 在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。
（6）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的 1.33 倍的流速流过，使柱床稳定（注意压力不要超过填料最大耐压）。
4.2平衡
让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，直到流出液电导和 pH 不变。平衡液是低浓度的缓冲溶液，如 NaAC、PBS 等。
4.3上样
（1）样品用平衡液配制，样品一定要离心或过滤后上样。盐浓度太大的样品需要处理后再配。
（2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。
（3）介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和 pH 值。盐浓度小，介质对样品组分吸附较牢。用 CM 介质时，推荐的操作 pH 值应在缓冲液 pKa 的 0.5 个单位内，并且和目标分子的等电点（pI）相差至少一个 pH 单位。
对于目标分子的吸附，选择具有适当 pH 的缓冲液是至关重要的，请参考下表；
Buffers for cation exchange chromatography
4.4洗脱
CM 介质可用增大盐浓度或增大 pH 值进行洗脱，常用增大盐浓度的办法洗脱。
4.5再生
一般用高盐浓度的缓冲液（含 1~2mol/L NaCl）洗或增大 pH 洗 10 倍以上柱体积，接着用结合蛋白的平衡液洗到平衡，可再次使用。
若有失活蛋白质或脂类物质在再生时洗不掉，可用在位清洗（CIP）除去。
4.6在位清洗
（1）对于以离子键结合上去的蛋白，可以用 2M Nacl 去除。
（2）对沉淀蛋白、以疏水性结合的蛋白或脂类，可用 0.1 M NaOH 去除。清洗完毕后，用至少 10 倍纯水清洗柱子至中性。
5 保存
使用完的填料，用纯水彻底冲洗，最后保存在 4℃（保存溶液为 20%乙醇），不能冷冻。
6 注意事项
（1）上样之前，样品必须经过膜过滤及去除色素，否则杂质及色素会被吸附到填料上，影响填料的 正常使用。所有的缓冲液均需要用 0.45um 的过滤器过滤。
（2）在使用过程中，避免使用高浓度的强酸强碱，酸和碱的浓度应低于 0.1 摩尔。碱会使流速变慢。
（3）不同的样品，吸附和洗脱方法不相同，可以根据相关的文献进行。
（4）离子交换介质在选择层析柱时，避免使用细长柱，会增加实验操作压力。
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业务员小张
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