AH109感受态细胞（用于文库转化）

货号： KU-CC300

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中文名称	AH109感受态细胞（用于文库转化）
英文名称	AH109 Chemically Competent Cell (for Yeast library）
有效期	6月

AH109菌株来源于PJ69-2A酵母菌株，将lacZ报告基因引入PJ69-2A诞生了AH109，此菌株是GAL4系统酵母双杂实验用菌株，MATa型，可直接转化质粒或与MATα型酵母菌株Y187通过mating操作进行蛋白互作验证或筛库试验。Transformation marker为：trp1，leu2，报告基因为：lacZ，HIS3，ADE2，MEL1。AH109-GAL4酵母双杂系统需要两种质粒配套使用：pGBKT7和pGADT7。质粒pGBKT7的筛选标志为TRP1，用于表达DNA-BD (来自酵母转录因子GAL4 N端1~174位氨基酸)与目标蛋白 (Bait)的融合蛋白；质粒pGADT7的筛选标志为LEU，用于表达AD (GAL4 C端768~881位氨基酸)与目标蛋白 (Prey)的融合蛋白。 GAL4系统原理：一个完整的酵母转录因子GAL4可分为功能上相互独立的两个结构域：位于N端1~174位氨基酸区段的DNA结合域 (DNA-BD)和位于C端768~881位氨基酸区段的转录激活域 (AD)。DNA-BD能够识别GAL4-responsive gene的上游激活序列UAS，并与之结合。而AD可以启动UAS下游的基因进行转录。BD和AD单独存在不能激活转录，但当二者接近时，则呈现完整的GAL4活性，使含有UAS的启动子下游基因转录表达。正常条件下，BD不与AD结合，将要检测的蛋白质分别与BD和AD 融合，形成Bait融合蛋白 (Bait-BD)和Prey融合蛋白 (Prey-AD)，如果Bait和Prey发生相互作用，就会促使BD和AD的相互接近，形成完整的GAL4，从而激活报告基因的转录。 AH109有四个报告基因：lacZ，HIS3，ADE2，MEL1，分别由三种不同的启动子 (GAL1，GAL2，MEL1)启动，这三种启动子只有GAL4识别的17 bp核心区相同，其余部分均不同，大大降低了酵母双杂假阳性发生的概率。AH109感受态细胞经特殊工艺制作，-80℃可保存六个月，pGADT7质粒检测转化效率>104 cfu/μg DNA。