中国仓鼠卵巢细胞（CHO）是目前生物工程上广泛使用的细胞，是表达复杂生物大分子的理 想宿主，在医药研发治疗性蛋白生产中发挥着非常重要的作用。BDBIO CHO 无血清培养基 是一款无血清、无动物源成分的培养基，包括各种高性能、现成的 CHO 细胞系培养基和添 加物，是应用 CHO-DG44、CHO-K1、CHO-S 和 CHO-GS 等细胞系进行蛋白质生产的理 想材料。 使用方法 细胞传代：1.37℃水浴预热CHO无血清完全培养基；2.从培养箱中取出摇瓶，取少量细胞悬液进行细胞密度及活力检测；3.按照密度为3-5×105/ml个细胞接种至新的摇瓶中，置于37℃、CO2含量为5%-8%的培养箱中，摇床(振幅50mm,转速110-120rpm）上培养。4.当活细胞密度≥4×106时进行传代，使用新鲜CHO无血清培养基按3-5×105/ml重悬细胞，并将细胞接种至新摇瓶。培养基适应（大部分情况不需要）：直接适应1.将细胞直接稀释到预热的CHO培养基中，活细胞密度为3-5×105/ml，转移到合适的培养容器中。2.置于培养箱，监测细胞生长情况。如果使用直接适应法观察到细胞生长不理想，则使用顺序适应法。顺序适应1.细胞以3-5×105/ml的密度接种至含1/3CHO无血清培养基和2/3原培养基的培养瓶中，置于37℃、5%-8%CO2培养箱中培养。2.当细胞密度达到4×106/ml，以3-5×105/ml的密度进行传代，接种至含2/3CHO无血清培养基和1/3原培养基中培养。3.当细胞密度达到4×106/ml，以3-5×105/ml个活细胞密度进行传代，接种至含100%CHO无血清培养基中培养。4.使用100%CHO无血清完全培养基继续传代几次后，活细胞数应超过4×106/mL，培养4-6天存活率≥90%，此时被认为培养基适应已经完成。瞬时转染：1.在瞬转开始之前，细胞应完全适应CHO无血清培养基，CHO细胞生长状态正常，传代倍增时间稳定（一般20-24h），细胞活率维持95%以上，方可进行瞬转测试。2.配置DNA-PEI核酸-转染试剂复合物(DNA：1.5mg/L，PEI：7.5mg/L），室温孵育15-20min。3.转染时调整活细胞密度为6x106cells/ml（离心去掉旧培养液，改用新培养基最佳），并在Day1加入1.5mM丙戊酸钠。转染之后的整个培养过程中，应该密切注意细胞活率和密度，在Day1-3-5-7-9-11添加5%补料进行高密度高产量表达，葡萄糖按需添加。4.当细胞活率低于80%，培养结束，收取上清液，纯化目标产物。5.（培养过程中参数建议如下：初始培养温度36.5℃，Day1温度降低至32~33℃，pH:7.1±0.2，DO：40%。摇床转速120rpm，振幅50mm,5-8%CO2）。 注意事项 1.液体细胞培养基应置于2～8℃避光保存。2.针对不同的细胞株，由于代谢或对营养物质的需求不同，需要针对性的优化补料量，以更好的提高表达量。 声明 仅用于科研使用，不能用于临床诊断和治疗。 保存条件 2-8℃，有效期12个月。