外周血细胞包括白细胞、红细胞、血小板三类，而白细胞是粒细胞、单核细胞、淋巴细胞的 总称。由于外周血中，不同血细胞的形态、大小以及比重不同，利用密度梯度离心法分离后， 至上而下分别为血浆层、外周血单核细胞层、淋巴细胞分离液层、红细胞以及粒细胞层。 BDBIO 大（小）鼠外周血淋巴细胞分离液经过一定的配方优化和改良，和大（小）鼠外周血 近于等渗，对于淋巴细胞分离的提取率大于 80%。 使用方法 根据血液样本，分以下两种情况：情况A：血液样本量0.5-2.0ml时，实验方法如下：1.取一支10ml无菌硅化离心管，加入4ml分离液，再缓慢加入0.5-2.0ml血液样本。血液样本小心加于分离液液界面之上。（分离液不得少于3ml，血液样本不得少于0.5ml）；2.以450g，离心30min。（注：如改变血液样本及分离液用量，需相应调整离心力及离心时间。）；3.离心后，离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色（大/小鼠）淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。4.小心吸取血浆层转移到新离心管中标记为A。小心吸取离心管中的环状乳白色（大/小鼠）淋巴细胞层转移到新离心管中标记为B。5.向含有（大/小鼠）淋巴细胞的离心管B中，加入10ml清洗液，混匀细胞。6.250g，离心10min，弃去上清。7.用吸管吸取5ml清洗液重悬所得细胞。8.250g，离心10min，弃去上清。9.重复清洗两次，弃去上清，用0.5ml清洗液或根据下一步实验需求加入相对应液体，重悬所得细胞。情况B：血液样本量2.0-4.0ml时，实验方法如下：1.取15ml的无菌离心管，小心加入5ml分离液，加入血液样本量2.0-4.0ml。血液样本小心加于分离液界面之上。（总液体量不得超过2/3）2.以500g，离心30min。（注：根据血液样本量确定离心条件，血液量越多，离心力越大，离心时间越长，具体离心条件需客户自行摸索，以达到最佳分离效果。）3.离心后，离心管中由上至下分为四层。第一层为血浆层。第二层为环状乳白色（大/小鼠）淋巴细胞层。第三层为透明分离液层。第四层为红细胞层。4.小心吸取血浆层转移到新离心管中标记为A。小心吸取离心管中的环状乳白色（大/小鼠）淋巴细胞层转移到新离心管中标记为B。5.向含有（大/小鼠）淋巴细胞的离心管B中，加入10ml清洗液，混匀细胞。6.250g，离心10min，弃去上清。7.用吸管吸取5ml清洗液重悬所得细胞。8.250g，离心10min，弃去上清。9.重复清洗两次，弃去上清，用0.5ml清洗液或根据下一步实验需求加入相对应液体，重悬所得细胞。分离过程中可能出现的情况及处理方案：淋巴细胞层混杂红细胞：1.吸取有红细胞混杂的淋巴细胞层。2.取15毫升离心管加入红细胞混杂的淋巴细胞，根据红细胞残余数量酌情加入5-8倍红细胞裂解液，少时多次裂解后获得淋巴细胞。 注意事项 1.本产品使用前，请先颠倒混匀，并在无菌环境下打开使用。2.试剂包装如有破损或滴漏，严禁使用。3.分离时最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品,应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，避免细胞挂壁，影响分离效果。4.本产品严禁冷藏。低温容易出现白色结晶，影响分离效果。5.为达到实验的最佳效果，推荐在取血2h内分离，如达不到2小时内分血条件，请务必4小时内进行分血步骤，超过4小时很难顺利进行分离。6.吸取过多的淋巴细胞层及分离液层会导致分离液交界处的粒细胞被吸出从而使混杂的粒细胞数量增加。7.吸取过多的淋巴细胞层上层溶液会导致血浆蛋白及血小板混杂。8.不当的稀释方法会降低细胞得率及活性。稀释液要求：不含钙镁离子的缓冲液或培养基。血液样本经过稀释则分离过程中需适当降低离心力和离心时间。9.使用水平转子离心机，离心机使用时调整为慢升慢降，建议升速的时间、降速时间均控制在3分钟左右。10.禁止使用超出规定有效期的产品。 声明 仅用于科研使用，不能用于临床诊断和治疗。 保存条件 室温避光储存，有效期24个月。