制品内容 (Code No.: RR047A: 20 μl反应×100次量) 1. gDNA Eraser 100 μl 2. 5X gDNA Eraser Buffer*1 200 μl 3. PrimeScript RT Enzyme Mix I*2 100 μl 4. 5X PrimeScript Buffer 2(for Real Time)*3 400 μl 5. RT Primer Mix*4 400 μl 6. RNase Free dH2O 1 ml×2 7. EASY Dilution (for Real Time PCR)*5 1 ml *1 5X gDNA Eraser Buffer在反转录反应前使用，请务必进行基因组DNA的除去反应。 *2 含有RNase Inhibitor。 *3 含有dNTP Mixture。 *4 含有Oligo dT Primer和Random 6 mers。 *5 制作标准曲线时梯度稀释cDNA或RNA标准品的稀释液。模板cDNA或RNA如果用水或TE Buffer稀释时，由于受Microtube吸附作用等的影响，往往不能准确地进行稀释，导致实验结果精度降低。使用本制品时，即使稀释至低浓度也能够进行准确地稀释，容易在宽广范围内获得准确定量的标准曲线。本制品不影响反转录和PCR反应，用其稀释后的样品可直接使用。EASY Dilution (for Real Time PCR) (Code No. 9160/9160Q) 也可以单独购买。 注意：EASY Dilution (for Real Time PCR) 请与本公司Real Time PCR试剂组合使用，对于其他公司的同类制品的适用性本公司尚未进行确认。 ■ 制品说明 为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但Total RNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。但是，此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。在这种情况下，我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理，以除去残存的基因组DNA。而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。 PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser，通过42℃，2 min即可除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA，因此，20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA合成的全过程。 使用本制品合成的cDNA适用于嵌合法和探针法qPCR分析，可以根据实验目的，选择与TB Green® Premix Ex Taq™ II (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR820Q/A/B)*、TB Green Premix Ex Taq (Tli RNaseH Plus) (Code No. RR420A/B)*、Probe qPCR Mix (Code No. RR391S/A/B) 组合使用。
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